יום כיפור הוא יום שנקבע בתורה והתקבל במסורת עם ישראל כיום שמוקדש לעיסוק בתשובה, תיקון, כפרה וטהרה.
כמו בשבת, ביום כיפור שובתים מכל מלאכה. המנהג המרכזי המזוהה עם יום כיפור הוא הצום, כלומר הימנעות מאכילה ושתייה. בנוסף נהוג להימנע מרחצה וסיכה (כלומר מריחת קרמים ומשחות); לא נועלים נעלי עור, אלא רק נעלי בד או פלסטיק; וכמו כן לא מקיימים יחסי אישות. כל האיסורים הללו נקבעו בעקבות הציווי "ועניתם את נפשותיכם", והם יוצרים יום שבו מתנתקים מצורכי הגוף והנאותיו, ומתמקדים בעבודת הנפש והרוח. יש בהם גם ממד של "עינוי" ממשי - ייסורים המסייעים לכפרה ולהתנקות מן העוונות.
בערב יום כיפור אוכלים סעודה מפסקת לפני הצום. כמו בערב שבת מדליקים נרות ומברכים עליהם. בבית הכנסת פותחים את התפילות בערב יום כיפור בתפילת "כל נדרי" שבה מתירים את נדרי הציבור. לקראת מוצאי יום כיפור מתפללים תפילת נעילה, והיא מסתיימת בתקיעת שופר עם צאת הכוכבים. רבים נוהגים להתחיל במוצאי יום כיפור בבניית הסוכה של חג סוכות.